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Lympholyte-Rat大鼠淋巴细胞分离液

品牌：CEDARLANE点击下载说明书

储存：常温，启封后4度，避光

简述：

Lympholyte-Rat是专门用于从大鼠淋巴组织或血液中分离淋巴细胞和单核细胞的密度梯度分离液。

参数：

成分：Polysucrose 400和Sodium Diatrizoate

密度：1.094±0.001g/cm³ 22摄氏度

pH：6.9±0.3

分离结果：活淋巴细胞的得率≥70%，剩余红细胞≤15%。

储存条件：

未开盖时，室温保存；开盖后，储存于4摄氏度。但都要避光。

操作步骤：

注意：样本制备可使用无血清培养基，减少样本粘度，更利于分离。

1.用推荐的方法和培养基准备一个淋巴细胞悬液。

建议的方法：

• 将脾脏切成小块

• 制备成组织匀浆

• 通过细筛网过滤

其他组织：彻底匀浆，获得干净的悬浮液。

2.将细胞浓度调整为每毫升最多2 x 10⁷个有核细胞。

注意：如果细胞悬液中含有大量的碎片或红细胞，如果细胞浓度设置为1.0 x 10⁷个细胞/mL，可得到更干净的分离。

3.根据不同的方法进行分离：

方法A：

①向离心管中加入5 mL Lympholyte^®-Rat；

②使用移液管，小心地将5 mL细胞悬液铺在Lympholyte^®-Rat上，在界面上尽可能少地混合（图A）；

③由于Lympholyte^®-Rat的密度比细胞悬液更大，因此将形成一个明显的界面（图C）。

方法B：

①在离心管中加入5 mL细胞悬液。将一个大的(23厘米）移液管放置到试管的底部（图B）；

②慢慢地将Lympholyte^®-Rat加入移液管中，重力将其置于细胞悬液下。继续直到5 mL Lympholyte^®-Rat在细胞悬液下分层；

③由于Lympholyte^®-Rat比细胞悬液密度更大，因此将形成一个明显的界面（图C）。

4.在室温下，1000-1500g离心20分钟；

5.离心后，在界面上将有一个明显的淋巴细胞层（图D）。使用移液管，小心地将细胞从界面上吸出，并转移到一个新的离心管中；

6.用培养基稀释重悬细胞。800g离心10分钟，沉淀淋巴细胞，然后弃用上清液；

7.在进一步处理之前，在培养基中清洗淋巴细胞2-3次（现在可以使用含有血清的培养基）2-3次。