马  外周血  血小板  

马外周血血小板分离液试剂盒

品牌：天津灏洋/TBD点击下载说明书

储存：常温保存，有效期2年。启封后置常温保存

【包装规格】 200ml/Kit
【产品组成】 为方便广大用户使用，试剂内容如下：

【实验前准备】
1.    适用仪器
最大离心力可达 1200g 的水平转子离心机。
（离心机使用时调整为慢升慢降（具体参数请咨询离心机厂家）建议升速（指开始启动→达 到设定离心力）的时间、降速（指设定离心时间完成→机器完全停止）时间均控制在 3 分钟 左右。）
2.    抗凝剂的选择 在动物实验采血时，很多实验者选择医用真空采血管获得抗凝血，医用采血管中的抗凝剂只考虑血浆质量，但不利于高纯度细胞分离实验（或必须使用枸橼酸钠的医用真空抗凝采 血管）
为此，天津灏洋特别开发出专用实验动物抗凝剂及抗凝管专用于细胞分离，改变使用普 通采血管获得抗凝血分离效果不佳，提取率及纯度低下的不良结果。

3.    目的细胞最佳分离时间
血液离体后 2 小时内。如达不到 2 小时内分血条件，请务必于 4 小时内进行分血步骤，超过 4 小时很难顺利进行分离。

4.    分离液的使用环境
a. 分离液需常温（37℃-15℃）避光保存，严禁冷藏冷冻保存；
b. 使用时严格遵守无菌操作规范（超净工作台或生物安全柜内），并在 18℃-22℃环境温 度下进行操作，20℃条件下分离效果最佳。超出此温度范围，有可能使分离液密度发生 改变，造成分离效果不佳。
5.    PBMC 高效离心管（详见 PBMC 高效离心管使用说明）

6.    参考值（目的细胞参考范围）
本试剂盒可保证目的细胞的提取率大于    80%，不是纯度。如需获得高纯度目的细胞， 请配合免疫磁珠分选。本试剂盒可减少磁珠的使用量，减少成本。
【检验方法】
全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃（试剂需要复温。夏季 20℃， 冬季 25℃。）的条件下进行。
方法一：
1. 在 PBMC 高效离心管中，首先取抗凝血加于分离液之液面上(抗凝血与分离液最佳比例
1：2。分离液试剂不得少于 4ml，总液体量不得超过 2/3）。
2. 以 250-300g，离心 15min (注：根据血液样本量确定离心条件，血液样本量越多，离心力 越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果)。
3. 离心后，此时离心管中由上至下分为四层。第一层为血小板血浆层。第二层为环状乳白 色细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。
4. 用吸管小心吸取第一层血小板血浆层到新 15ml 离心管中，往所得离心管中加入同体积样 本稀释液(产品编号：2010C1119)，混匀血小板。
注：如需获得的富集血小板血浆则不需加入样本稀释液，直接取血浆层即得。
5. 以 500g，离心 20min，离心后弃去上清。
6. 向含有血小板沉淀的离心管中加入 10ml 清洗液(产品编号：2010X1118)混匀，以 450g， 离心 15min，弃上清。
7. 用 0.5ml 清洗液（产品编号：2010X1118）或根据下一步实验要求加入相对应液体，重悬 所得细胞。
分离图例

方法二(需获得血小板富集血浆的客户请勿选择此方法)：
1. 取 15ml 无菌离心管，先加入 4ml 分离液，再小心加入 1.5ml 的 80%的分离液溶液（分离 液与样本稀释液 8：2 混合），叠加于分离液之液面上形成梯度界面。
2. 将抗凝血液样本 2-3ml 小心加于分离液之液面上，以 400g，离心 20min。
3. 离心后，环状血小板层存在于血浆层中。
4. 取血小板层或血浆层(血小板层不明显时)于另一 15ml 离心管中。
5. 向含有血小板的离心管中加入 10ml 清洗液(产品编号：2010X1118)混匀，以 450g，离心 15min，弃上清。
6. 用 0.5ml 清洗液（产品编号：2010X1118）或根据下一步实验要求加入相对应液体，重悬 所得细胞。 
分离图例

【注意事项】
1. 本实验最好不使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，应使用无静电、低静电离心 管及未经碱处理过后的玻璃制品，因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面会 变成毛面，影响细胞分离效果。
2. 吸取过多的血小板血浆层下层溶液会导致交界处单个核细胞混杂。
3. 分离液用量大于血液样本时，分离效果更佳。
4. 如实验后细胞得率或活性过低，请联系天津灏洋技术支持以寻求帮助，具体联系方式 详见下方生产企业信息。
【储存条件及有效期】
常温保存，有效期  2    年。本品易感染细菌，需无菌条件操作。无菌条件下操作，启 封后置常温保存。如   4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。
【参考值（参考范围）】 本实验血小板提取率大于 80%。
下表为成年人外周血中各种细胞的数量及比例，用户可适当进行参考。

【可能存在的问题及解决方法】
1.    由于血液粘度、细胞密度等差异可能造成的问题及解决方案如下表所示：

2.  离心力公式及单位换算

3.    本分离液分离细胞的原理为密度梯度离心，其密度与温度、大气压等密切相关。不同地区客户可根据当地情况对离心条件进行适当调整。建议对离心条件进行调整时，恒定离 心时间，对离心转速进行调整。
4.    本分离液依照国际标准，全部使用药用级原料，性能指标与国产同类产品略有不同，可 能出现红细胞沉降不完全的情况，可以适当加大离心转速。
注：在对离心条件进行调整时，离心转速的加减以  50-100g    为基数，直至达到最佳分离效果， 离心力最小不得小于 400g，最大不得大于 1200g。离心时间以 20-30min 为准。
备注：TBD0049SOP，2023.0116-3