密度梯度分离 > 即用型分离液
货号 | 规格 | 价格 | 货期 |
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PLA2011M | 200mL/KIT | 600 510 | 现货 |
详细说明
【包装规格】 200ml/Kit
【产品组成】 为方便广大用户使用,试剂内容如下:
名称 | 编号 | 规格 | |
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A | 人&各种动物外周血血小板分离液 | 200ml | |
B | 样本稀释液 (赠品) | 2010C1119 | 200ml |
C | 清 洗 液 (赠 品 ) | 2010X1118 | 200ml |
D | 说明书 | 1 份 |
【实验前准备】
1. 适用仪器
最大离心力可达 1200g 的水平转子离心机。
(离心机使用时调整为慢升慢降(具体参数请咨询离心机厂家)建议升速(指开始启动→达 到设定离心力)的时间、降速(指设定离心时间完成→机器完全停止)时间均控制在 3 分钟 左右。)
2. 抗凝剂的选择 在动物实验采血时,很多实验者选择医用真空采血管获得抗凝血,医用采血管中的抗凝剂只考虑血浆质量,但不利于高纯度细胞分离实验(或必须使用枸橼酸钠的医用真空抗凝采 血管)
为此,天津灏洋特别开发出专用实验动物抗凝剂及抗凝管专用于细胞分离,改变使用普 通采血管获得抗凝血分离效果不佳,提取率及纯度低下的不良结果。
序号 | 产品名称 | 产品货号 | 规格 |
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1 | TBDTM 细胞分离专用抗凝剂 | TBDTM-0050 | 100ml |
2 | TBDTM-0200 | 200ml | |
3 | TBDTM-0500 | 500ml | |
4 | TBDTM 实验动物一次性使用负压采 血管(随试剂盒附赠 5 支) | TBDTM-0001 | 5ml/支 |
3. 目的细胞最佳分离时间
血液离体后 2 小时内。如达不到 2 小时内分血条件,请务必于 4 小时内进行分血步骤,超过 4 小时很难顺利进行分离。
血液离体时间 | 分离效果 |
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2 小时内 | 最佳 |
2-4 小时 | 可接受 |
4-6 小时 | 细胞活性下降,分离效果不佳 |
6 小时以上 | 分离效果极差,直至分离不出细胞 |
4. 分离液的使用环境
a. 分离液需常温(37℃-15℃)避光保存,严禁冷藏冷冻保存;
b. 使用时严格遵守无菌操作规范(超净工作台或生物安全柜内),并在 18℃-22℃环境温 度下进行操作,20℃条件下分离效果最佳。超出此温度范围,有可能使分离液密度发生 改变,造成分离效果不佳。
5. PBMC 高效离心管(详见 PBMC 高效离心管使用说明)
序号 | 产品名称 | 产品货号 | 规格 |
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1 | PBMC 高效离心管 | 601001 | 50ml |
2 | PBMC 高效离心管(随试剂盒附赠 5 支) | 601002 | 15ml |
6. 参考值(目的细胞参考范围)
本试剂盒可保证目的细胞的提取率大于 80%,不是纯度。如需获得高纯度目的细胞, 请配合免疫磁珠分选。本试剂盒可减少磁珠的使用量,减少成本。
【检验方法】
全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃(试剂需要复温。夏季 20℃, 冬季 25℃。)的条件下进行。
方法一:
1. 在 PBMC 高效离心管中,首先取抗凝血加于分离液之液面上(抗凝血与分离液最佳比例
1:2。分离液试剂不得少于 4ml,总液体量不得超过 2/3)。
2. 以 250-300g,离心 15min (注:根据血液样本量确定离心条件,血液样本量越多,离心力 越大,离心时间越长,具体离心条件需客户自行摸索,以达到最佳分离效果)。
3. 离心后,此时离心管中由上至下分为四层。第一层为血小板血浆层。第二层为环状乳白 色细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。
4. 用吸管小心吸取第一层血小板血浆层到新 15ml 离心管中,往所得离心管中加入同体积样 本稀释液(产品编号:2010C1119),混匀血小板。
注:如需获得的富集血小板血浆则不需加入样本稀释液,直接取血浆层即得。
5. 以 500g,离心 20min,离心后弃去上清。
6. 向含有血小板沉淀的离心管中加入 10ml 清洗液(产品编号:2010X1118)混匀,以 450g, 离心 15min,弃上清。
7. 用 0.5ml 清洗液(产品编号:2010X1118)或根据下一步实验要求加入相对应液体,重悬 所得细胞。
分离图例
方法二(需获得血小板富集血浆的客户请勿选择此方法):
1. 取 15ml 无菌离心管,先加入 4ml 分离液,再小心加入 1.5ml 的 80%的分离液溶液(分离 液与样本稀释液 8:2 混合),叠加于分离液之液面上形成梯度界面。
2. 将抗凝血液样本 2-3ml 小心加于分离液之液面上,以 400g,离心 20min。
3. 离心后,环状血小板层存在于血浆层中。
4. 取血小板层或血浆层(血小板层不明显时)于另一 15ml 离心管中。
5. 向含有血小板的离心管中加入 10ml 清洗液(产品编号:2010X1118)混匀,以 450g,离心 15min,弃上清。
6. 用 0.5ml 清洗液(产品编号:2010X1118)或根据下一步实验要求加入相对应液体,重悬 所得细胞。
分离图例
【注意事项】
1. 本实验最好不使用高聚合材质(如聚苯乙烯)的塑料制品,应使用无静电、低静电离心 管及未经碱处理过后的玻璃制品,因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面会 变成毛面,影响细胞分离效果。
2. 吸取过多的血小板血浆层下层溶液会导致交界处单个核细胞混杂。
3. 分离液用量大于血液样本时,分离效果更佳。
4. 如实验后细胞得率或活性过低,请联系天津灏洋技术支持以寻求帮助,具体联系方式 详见下方生产企业信息。
【储存条件及有效期】
常温保存,有效期 2 年。本品易感染细菌,需无菌条件操作。无菌条件下操作,启 封后置常温保存。如 4℃保存,本分离液易出现白色结晶,影响分离效果。
【参考值(参考范围)】 本实验血小板提取率大于 80%。
下表为成年人外周血中各种细胞的数量及比例,用户可适当进行参考。
红细胞 | 白细胞 | 血小板 | |||
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含量(个/L) | (4.0-5.5)×1012 | (4.0-10.0)×109 | (1.0-3.0)×1011 | ||
中性粒细胞 | 淋巴细胞 | 单核细胞 | |||
50%-70% | 20%-40% | 3%-8% |
【可能存在的问题及解决方法】
1. 由于血液粘度、细胞密度等差异可能造成的问题及解决方案如下表所示:
出现情况 | 出现原因 | 建议解决方案 |
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离心后目的细胞存在于血浆层或稀释液层 | 转速过小或离心时间过短 | 适当增减转速 |
离心后目的细胞存在于分离液中 | 转速过大或离心时间过长 | |
离心后白环层弥散 | 细胞密度过大 | 调整细胞密度 |
离心后白环层太浅或看不见 | 细胞密度过小 |
2. 离心力公式及单位换算
3. 本分离液分离细胞的原理为密度梯度离心,其密度与温度、大气压等密切相关。不同地区客户可根据当地情况对离心条件进行适当调整。建议对离心条件进行调整时,恒定离 心时间,对离心转速进行调整。
4. 本分离液依照国际标准,全部使用药用级原料,性能指标与国产同类产品略有不同,可 能出现红细胞沉降不完全的情况,可以适当加大离心转速。
注:在对离心条件进行调整时,离心转速的加减以 50-100g 为基数,直至达到最佳分离效果, 离心力最小不得小于 400g,最大不得大于 1200g。离心时间以 20-30min 为准。
备注:TBD0049SOP,2023.0116-3