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Lympholyte-M小鼠淋巴细胞分离液

品牌：CEDARLANE点击下载说明书

储存：未开盖时，室温保存；开盖后，储存于4摄氏度。避光。

简述：

Lympholyte-M是专门用于从小鼠脾脏、淋巴结、胸腺、骨髓、血液中分离淋巴细胞和单核细胞的密度梯度分离液，产品经过0.22um微孔过滤，无菌。

参数：

成分：Polysucrose 400和Sodium Diatrizoate

密度：1.0875±0.001g/cm³ 22摄氏度

pH：6.9±0.3

分离结果：活淋巴细胞的得率≥70%，剩余红细胞≤10%。

储存条件：

未开盖时，室温保存；开盖后，储存于4摄氏度。但都要避光。

操作步骤：

注意：使用前充分摇晃混匀，静止2-3min，待气泡消失后试用。（室温条件下使用分离液，分离液密度会随温度的变化而发生改变）

样本制备可使用无血清培养基，减少样本粘度，更利于分离。

 1.用推荐的方法和培养基制备淋巴细胞悬液。

建议的方法：

• 将脾切成小块

• 制备成组织匀浆

• 通过细筛网过滤

其他组织：彻底匀浆，获得干净的悬浮液

2.将细胞浓度调整至每毫升最多2 x 10⁷个有核细胞；

Note：如果细胞悬液中含有大量的碎片或红细胞，调整细胞浓度为1.0 x 10⁷个细胞/mL，可得到更干净的分离。

3.根据不同的方法进行分离：

方法A：

①在离心管中加入5 mL Lympholyte^®-M；

②使用移液管，小心地将5 mL的细胞悬液铺在Lympholyte^®-M上，在界面上尽可能少地混合（图A）；

③由于Lympholyte^®-M的密度比细胞悬液更大，因此将形成一个明显的界面（图C）。

方法B：

①在离心管中加入5 mL细胞悬液。将一个大的(23厘米）移液管放置到试管的底部（图B）；

②慢慢地将Lympholyte^®-M加入移液管中，重力将其置于细胞悬液下。继续处理，直到5 mL Lympholyte^®-M在细胞悬液下分层；

③由于Lympholyte^®-M比细胞悬液密度更大，因此将形成一个明显的界面（图C）。

4.在室温下，1000-1500g离心20分钟；

5.离心后，在界面上将有一个明显的淋巴细胞层（图D）。用移液管，小心地将细胞从界面上吸出，并转移到一个新的离心管中；

6.用培养基稀释分离的细胞，800g离心10分钟，沉淀淋巴细胞，弃上清；

7.将淋巴细胞在培养基中清洗2-3次，随后进行进一步处理。