碘克沙醇/IODIXANOL  

通用型细胞分离液

品牌：达优

储存：常温密封避光

SuperSepar™通用型细胞分离液

本品为通用型细胞分离液。主要成份为 Iodixanol，分子量为 1550。它是完全化学惰性、无生物毒性的碘化物，不会结合任何已知的生物功能蛋白，不会干扰任何细胞表面膜蛋白，不会抑制酶活性，不会干扰抗原抗体反应。

本品由 GSM-A、GSM-B 两种组分构成，将两种组分按一定的比例混合，可以形成不同密度的分离液，适用于各种动物细胞的分离。

产品信息：

商品名：Universal Cell Separation Medium  通用型细胞分离液

渗透压：285±20 mOsmol/kg

内毒素：< 1 EU/mL

主要成份：Iodixanol，化学惰性，无生物毒性    

适用范围：分离各种动物细胞

产品组成、规格和密度

储存方法及保质期：
常温密封避光保存，保质期 2 年。

使用方法：

公式：ρ = 0.206x + 1.0052（x 为 USM-A 的比例，ρ为混合分离液的密度）

根据以上的公式或者表 1 取一定比例的 USM-A 与 USM-B，混合均匀，得到密度确定的分离液，用于分离所需的细胞。其中，所得分离液的渗透压范围为 285~305 mOsmol/kg，密度误差范围 ±0.0005 g/ mL。

例如，需要配制 4mL 密度ρ =1.0810 g/mL 的分离液，分离小鼠/大鼠外周血中的淋 巴细胞，则：

x=(ρ-1.0052)/0.206 =(1.0810-1.0052)/0.206=36.8%
VUSM-A=4mL×36.8%=1.472mL，VUSM-B=4mL-VUSM-A=(4-1.472)mL=2.528mL
取 1.472mL    USM-A 与 2.528mL    USM-B 混合即可得 4mL 密度为 1.0810 g/mL 的 分离液。
分离操作如下：
1、 用移液枪取 1.472mL    USM-A 与 2.528mL    USM-B 于 15mL 离心管中，混合均匀备用。
2、 新鲜采集小鼠/大鼠抗凝血 0.5~4mL（全血体积≤分离液体积），用等体积的 PBS或生理盐水稀释全血。
3、 取另一 15mL 离心管，加入 4mL 配制好的分离液（或者把步骤 1 中的分离管 2000g 离心 1min，把离心管管壁上的分离液离心至底部），小心地将稀释的血液平铺在分 离液液面上层，避免两种液体界面混合。
4、 室温，水平转子 800g 离心 15~20min。设置较慢的加速度和减速度（如果有十档， 设为第三档）。
5、 离心结束后，管底是红细胞，中间层是分离液，最上层是血浆层，血浆层与分离液 层之间的白膜层就是淋巴细胞层，吸取白膜层到另一离心管中，再加入 10mL 等渗 溶液（PBS、生理盐水或培养基等），颠倒混匀。室温，水平转子 250g，离心 10min 弃上清。重复洗涤 1~2 次。
6、 用等渗溶液重悬细胞，计数备用。

表 1  通用型细胞分离液的密度表（以 4mL 为例）

注意事项：

• 本品需要在无菌的环境下使用，避免微生物的污染。
• 使用前恢复至室温并轻轻摇匀，现配现用。
• 分离液易挥发，每次使用后及时盖紧瓶盖。
• 取样仪器的精准度对混合分离液的终密度有较大的影响，建议使用校准后的移液枪 操作，勿使用量筒等粗量仪器。
• 配制分离液和分离细胞的过程中，温度控制在（20±5）℃，否则会影响分离效果。
• 分离液开封后，请尽量保存在 2℃~8℃环境，避免因液体挥发造成分离液密度变化， 影响分离效果。

版本号：C/4