人  中性粒细胞  外周血  

Histopaque-1119

品牌：Sigma/西格玛

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储存：2-8度，避光，不可冷冻

产品描述
Histopaque -1119 是一种无菌的，内毒素测试的多蔗糖和泛影酸钠溶液，调整到1.119 g/mL 的密度。这种现成的溶液，当与Histopaque-1077 联合使用时，可离心分离小体积全血中活的单个核细胞和粒细胞。Histopaque-1119 和Histopaque-1077 采用了已发表的一步法的方案¹。

溶液成分
Histopaque-1119 是60 g/L 的多蔗糖/polysucrose和167 g/L 的泛影酸钠的无菌溶液。

参数
密度:1.118-1.120 g/mL
内毒素/Endotoxin:≤3 EU/mL
pH 值:8.8-9.0
所需试剂和设备（本产品不包含）

1. Histopaque-1077， 产品编号10771
2. 离心机(水平转子)能够产生700 × g
3. 离心管， 15 mL 塑料， 锥形底
4. 等渗PBS/磷酸盐缓冲盐水溶液或适当的细胞培养基

注意事项和免责声明
仅供研发使用。不可用于药品、家用或其他用途。有关危险和安全操作方法的信息，请参阅安全数据表。
准备
标本采集-采集无防腐剂抗凝血(EDTA 或肝素)或使用去纤维血。为达到最佳效果，血液应在采集后2 小时内处理完毕。
存储
储存在2-8°C 避光。Histopaque-1119 的有效期为3 年。试剂标签上有有效期。

操作步骤
双梯度由等量的Histopaque-1077 在Histopaque-1119 上分层形成。抗凝全血小心地铺到上部的Histopaque-1077 溶液上。在离心过程中，红细胞被多聚糖聚集并迅速沉淀。在Histopaque-1077/1119 界面下部发现了粒细胞;而淋巴细胞和其他单个核细胞则出现在血浆/Histopaque-1077 界面的上部。红细胞污染可以忽略不计。在上界面发现的大多数血小板在洗涤步骤中通过低速离心除去。
1.向15 mL 锥形离心管中加入3 mL Histopaque-1119。
2.小心地在Histopaque-1119 上分层加入3ml Histopaque-1077，并置于室温。
3.小心地将6 毫升全血分层到步骤2 中的试管上部梯度上。
4.700 × g 室温离心30 分钟。在较低的温度下离心，如4℃，可能会导致细胞结块，回收率较差。
注意:确保离心机上的刹车和加速调到最低档，刹车和加速太猛可能会影响层分离。
5.小心取出离心管。应该观察到两个不同的不透明层。
6.抽吸并丢弃血浆至距上层0.5 厘米以内。将细胞从这一层转移到标有“单核”的试管中。
7.抽吸并排出剩余液体至下层0.5 厘米处。将这一层的细胞转移到标记为“粒细胞” 的试管中。

8.向试管中加入10ml 等渗PBS/磷酸盐缓冲盐水，清洗细胞。200 × g 离心10 分钟，取上清弃用。
9.用巴斯德移液管轻轻地吸进吸出，使细胞重新悬浮。
10.重复步骤8 和9 两次。
11.将细胞重悬于适当体积的等渗PBS/磷酸盐缓冲盐水溶液或适当的细胞培养基中。

此时可以用以进行后续的各种化验。具体步骤的选择取决于个人。
结果
红细胞应沉降至离心管底部。
粒细胞应在Histopaque-1119 和Histopaque-1077的界面上形成条带。
单个核细胞应在Histopaque-1077 和血浆的界面处形成条带。
如果观察结果与预期结果不同，请联系技术支持寻求帮助。
参考文献
1. English, D., and Andersen, B.R., Single-step separation of red blood cells. Granulocytes and mononuclear leukocytes on discontinuous density gradient of Ficoll-Hypaque. J. Immunol. Methods, 5, 249 (1974).
Histopaque 是Sigma-Aldrich Co. LLC 的注册商标。
Ficoll 是cytiva/思拓凡（原GE Healthcare） 的注册商标。

备注：Mf, mam, VNC 04/20-1