猴  单个核细胞  淋巴细胞  外周血  

猴淋巴细胞分离液

品牌：达优

储存：常温密封避光

产品介绍：

猴淋巴细胞分离液为即用型，含有聚蔗糖，它能加速红细胞皱缩沉淀，有助于提高淋巴细胞的分离效果。该产品无菌包装，通过内毒素检测。分离获得的细 胞经洗涤后能用于体外培养，不影响后续实验操作。
本品主要用于猴外周血淋巴细胞的分离。

技术参数：
密度：（1.077±0.001）g/mL；渗透压：（295±20）mOsmol/kg

分离原理介绍：
密度梯度沉降法是根据细胞密度差异，借助细胞分离液和离心，进行细胞分 离纯化的常用方法之一。细胞分离液产生一定程度的密度梯度，将稀释后的全血 平铺于分离液之上，离心后，红细胞、粒细胞比重大，沉于管底；淋巴细胞和单 核细胞的比重小于或等于分离液比重，漂浮于分离液的液面上，也可有少部分细 胞悬浮在分离液中。吸取分离液液面的细胞，就可从外周血中分离到单个核细胞。

储存条件及保质期：
常温密封避光保存，保质期 2 年。

使用说明：
1.  取新鲜抗凝全血（EDTA、枸橼酸钠或肝素抗凝剂均可）。用等体积等渗溶 液（PBS 或生理盐水）稀释全血。
2.  在离心管中加入一定体积的分离液，将稀释后的血样平铺到分离液液面上方， 保持两液面界面清晰。分离液、抗凝未经稀释全血、等渗溶液（PBS 或生理 盐水）体积为 1:1:1。
3.  室温，水平转子 700-800g 离心 20-30min。设置较慢的升降速（如果共有十档 且第十档为最高档，升降速应该调整到第三档）。
4.  离心结束后，管底是红细胞，中间层是分离液，最上层是血浆/组织匀浆层， 血浆层与分离液层之间是一层薄较致密的白膜，即：单个核细胞（包括淋巴 细胞和单核细胞）层。小心吸取白膜层到另一离心管中。
5.  用等渗溶液（PBS、生理盐水或培养基）稀释到一定体积，颠倒混匀。室温，水平转子 250g，离心 10min，弃上清。重复洗涤 1-2  次。
6.  用等渗溶液（PBS、生理盐水或培养基）将淋巴细胞重悬备用。

注意事项：
1.  淋巴细胞分离液请于实验前放置至恢复室温，打开瓶盖前请颠倒混匀。
2.  稀释抗凝全血所用等渗溶液（PBS 或生理盐水）均为无菌液体，也可用 RPMI 1640  培养基稀释。
3.  1:1 稀释血液可降低红细胞的凝聚，提高淋巴细胞收获量。
4.  为保持淋巴细胞的活性，应该采血后尽快进行分离。分离细胞层实际上是单 个核细胞层，包括淋巴细胞和单核细胞。
5.  分离时请严格按照比例，每一份淋巴细胞分离液加两份稀释后的血液。若操 作无误但离心后的界面之间不能形成单个核细胞层，可能是血液量不足，或 未使用新鲜血液，或者不适于分离该种动物血液。
6.  分离液开封后，请尽量保存在 2℃~8℃环境，避免因液体挥发造成分离液密 度变化，影响分离效果。

版本号：C/5