密度梯度分离 > 即用型分离液
| 货号 | 规格 | 价格 | 货期 |
|---|---|---|---|
| 10771&11191 | 100+100mL | 1439.94 648 | 现货 |
详细说明
该产品包含： Histopaque-1077 100ML；Histopaque-1119 100ML。
Histopaque-1077和Histopaque-1119 都是主要成分为聚蔗糖和泛影酸钠、经过内毒素测试的无菌溶液，Histopaque-1077密度为1.077g/mL，Histopaque-1119 密度为 1.119 g/mL。 这两种即用型介质组合起来，可以用于从少量全血中，通过密度梯度离心同时得到具有活性的单核细胞和粒细胞，此方法是参照后续所列的参考文献。
技术参数：
1、Histopaque-1077
主要化学成分：聚蔗糖/polysucrose 57 g/L, 泛影酸钠/sodium diatrizoate 90 g/L
密度/Density: 1.076–1.078 g/mL
内毒素/Endotoxin: ≤0.3 EU/mL
pH: 8.8–9.0
2、Histopaque-1119
主要化学成分：聚蔗糖/polysucrose 60 g/L, 泛影酸钠/sodium diatrizoate 167 g/L
密度/Density: 1.118–1.120 g/mL
内毒素/Endotoxin: ≤0.3 EU/mL
pH: 8.8–9.0
分离原理：
由相等体积的Histopaque-1077在Histopaque-1119上面形成两层梯度。抗凝的全血被小心地铺在 Histopaque-1077 上面。 在离心过程中，红细胞被聚蔗糖迅速聚集沉淀。 粒细胞位于Histopaque-1077/1119 界面处； 而淋巴细胞和其他单核细胞位于上部的血液/Histopaque-1077界面处。 红细胞污染几乎可以忽略不计。 大多数血小板可以通过低速离心的洗涤步骤去除。
标本采集：
采集不含防腐剂、抗凝剂（EDTA 或肝素）或使用去纤维蛋白的血液。 为获得最佳效果，应处理血液2小时内。
分离步骤：
1. 将 3 mL Histopaque-1119 添加到 15 ml 离心管。
2. 小心地将 3 mL Histopaque-1077 铺在Histopaque-1119 上面并恢复到室温。
3. 小心地将 6 mL 全血铺在Histopaque-1077的上面。
4. 在室温下以 700 x g 离心 30 分钟。 低温离心，如 4 °C，可能会导致细胞结块和不良恢复。
5. 小心取出离心管。 应该可以看到两层上下分开的不透明细胞层。
6. 将距离上面的不透明层0.5 cm 以上的血浆吸出并丢弃。 将上面不透明层的细胞转移到标有“单核”试管中。
7. 将距离下面的不透明层0.5 cm以上的液体吸出并将其丢弃。 将下面的不透明层细胞转移到标有“粒细胞”的试管中。
8. 加入 10 mL 磷酸盐缓冲盐水等渗溶液至装有细胞的试管中，用于清洗细胞。 离心机200 x g 10 分钟。 去除上清液并丢弃。
9. 用巴斯德吸管轻轻抽吸重悬细胞。
10. 重复步骤 8 和 9 两次。
11. 将细胞重悬于适当体积的等渗磷酸盐缓冲盐水溶液或合适的细胞培养基中。
参考资料：
English, D., and Andersen, B.R., Single-step separation of red blood cells. Granulocytes and mononuclear leukocytes on discontinuous density gradient of ficoll-hypaque. J. Immunol. Methods, 5, 249 (1974). DOI: 10.1016/0022-1759(74)90109-4