产品资讯

人淋巴细胞分离液Lymphoprep的使用方法

阅读数:4477次  更新日期:2019-09-27   发布日期:2012-08-04

2019年9月27日更新:Axis-Shield厂家已经提供了Lymphoprep产品的中文版说明书,用户需要可以点击下载

挪威Axis-Shield公司的人淋巴细胞分离液Lymphoprep广为广大科研和临床用户所使用,本文依据厂家原说明书和诸多用户的使用情况,依次列出了该分离液的使用方法和步骤,以供各用户参考。

说明:1、此分离液得到的实际为淋巴细胞和单核细胞的混合物——单个核细胞,因其中单核细胞所占数量和比例较小,所以一般人们习惯将之称之为淋巴细胞分离液。2、此分离液即人们习惯称为Ficoll的淋巴细胞分离液,尽管事实上Ficoll只是该分离液中的成份之一。具体使用步骤如下:

第一步

在含有抗凝剂(EDTA、heparin、或ACD)的管子内收集血液,或者用去纤维蛋白的血液。此处抗凝剂的选择取决于得到淋巴细胞以后,后续实验的要求,一般选取EDTA即可。

第二步

用等体积的0.9%的NaCl溶液(即生理盐水)稀释血液。

第三步

在12-15ml的离心管内,将6ml稀释后的血液铺在3ml分离介质Lymphoprep上。

此处铺层可以采用从上面铺,或从下面铺两种方法。铺层的关键是不能让血液和分离液混在一起,要界面分层清晰。

第四步

在室温下——20摄氏度左右,用水平转子,800g的离心力,离心20分钟。(如果血液存放时间超过2小时——从人体抽出算起,离心时间延长为30分钟)。

第五步

离心前和离心后,离心管内液体分层如下图所示。   

离心后,离心管内位于血液和分离液界面处的明显的一层即为淋巴细胞层。

用移液管直接吸取淋巴细胞层,注意,不要去除上面的血液层,而是直接吸取。移至另一离心管中。

第六步

用大约2倍体积的0.9%的NaCl溶液(生理盐水)稀释收集到的淋巴细胞,在250g-300g的离心力下,离心10分钟,(此处在加上稀释液后的体积在15ml离心管内不宜超过5-6ml,体积过大,会降低淋巴细胞的产率),收集沉淀,即得到所需的人外周血单个核细胞,即可用于后续的实验。